Основные этапы анализа спермограммы:

• Параметры сперматозоидов: в спермограмме оценивают число сперматозоидов, их жизнеспособность, подвижность и морфологию.
• Иммунологический анализ спермограммы: тест с микрогранулами, покрытыми антителами к иммуноглобулину человека, тест микс-агглютинации (MAR). Эти тесты позволяют выявить антиспермальные антитела.
• Параметры семенной жидкости: биохимический анализ маркеров предстательной железы, семенных пузырьков и эпидидимиса. Эти анализы спермограммы позволяют оценить функцию половых желез.

Макроскопический анализ спермы:

• pH фактор, измеренный при помощи индикатора pH фактора
• Объем, измеренный при помощи взвешивания
• Внешний вид (специфический запах, цвет или вязкость)
• время разжижения
• отбор для бактериального анализа

Микроскопический анализ живых сперматозоидов

• Соединенные (агрегированные) сперматозоиды
• Эпителиальные клетки
• Лейкоциты
• Бактерии

Концентрация сперматозоидов, общее количество и жизнеспособность

Объем эякулята не связан со сперматогенезом, и, следовательно, концентрация сперматозоидов (сперматозоиды / мл) изменяется в зависимости от объема эякулята. Общее количество сперматозоидов в эякуляте отражает сперматогенез (образование сперматозоидов в яичках) и связано со временем воздержания перед сбором спермограммы. В норме цикл сперматогенеза занимает 72 дня, поэтому общее количество сперматозоидов, как полагают, должно увеличиваться в зависимости от времени воздержания. Объем эякулята зависит от секреторной функции семенных пузырьков и предстательной железы. Уменьшение объема эякулята и повышение концентрации сперматозоидов отражают ослабление функции дополнительных половых желез (семенных пузырьков и предстательной железы). Окрашивание живых сперматозоидов позволяет подсчитать количество живых сперматозоидов, независимо от их подвижности.

Подвижность сперматозоидов при проведении спермограммы

Фракцию подвижных сперматозоидов в сперме измеряют при помощи ручного подсчета или с использованием системы автоматизированного анализа спермы (CASA). Подвижность оценивают во время разжижения спермы и после первого и третьего часов, чтобы обнаружить астенозооспермию. В ходе ручного подсчета сперматозоиды разделяют на 4 категории (неподвижность, движение на месте, не линейная и линейная подвижность) с использованием качественных субъективных критериев отбора. В настоящее время многие центры по лечению бесплодия используют системы CASA для объективного измерения подвижности сперматозоидов. В ходе исследований была обнаружена положительная корреляция между параметрами подвижности, такими как амплитуда бокового смещения головки сперматозоида, криволинейной скорости, линейной и прямолинейной скорости и оплодотворением in vitro, но пороговые уровни этих характеристик движения еще окончательно не определены.

Бактериологический анализ спермы при проведении спермограммы

Бактериологический анализ спермы – это прямое измерение инфекционного загрязнения аэробными и анаэробными микробами, полученного при помощи посева спермы. В норме сперма не является стерильной и содержит небольшое количество колоний различных бактерий. Недавние исследования показали, что бактериальная колонизация, негативно не влияет на взаимодействие сперматозоидов с цервикальной слизью.

Биохимический анализ спермы

Биохимический анализ компонентов семенной жидкости, которая образуется в предстательной железе, семенных пузырьках и эпидидимисе, дает информацию о функциональном состоянии этих органов. Эти маркеры включают фруктозу, как маркер семенных пузырьков; цинк или кислотную фосфатазу, как маркер предстательной железы; карнитин, как маркер эпидидимиса. Цинк может быть измерен колориметрически, в то время как фруктозу и карнитин измеряют, используя ферментативные исследования.

Определение антиспермальных антител при проведении спермограммы

Присутствие антиспермальных антител в сперме может изменить фертильность (оплодотворяющую способность) спермы. Сперматогенез начинается в период полового созревания после того, как «обучение» иммунной системы распознавать собственные антитела закончено, поэтому сперматозоиды иммуногенны. В норме сперматозоиды защищены от иммунной системы человека гемато-тестикулярным барьером, который разделяет внутреннюю часть семявыносящих трубочек от крови. Если гемато-тестикулярный барьер повреждается, то в кровь могут попасть антигены сперматозоидов и вызвать образование антиспермальных антител. Антитела, адсорбированные на поверхности сперматозоида, могут быть обнаружены при иммунологическом исследовании, использующем микрогранулы, покрытые антителами к иммуноглобулинам человека. Процент сперматозоидов, прикрепившихся к гранулам, отражает присутствие в сперме антиспермальных антител.

В настоящее время для обнаружения антиспермальных антител класса IgG в сперме используются комплекты MAR-теста. Положительные и сомнительные пробы впоследствии проверяют на антиспермальные антитела класса IgA. Антитела IgA более клинически значимы, но редко появляются без ассоциированных антител класса IgG. Поэтому тест на антиспермальные антитела IgG в сперме достаточен для первоначального исследования. Антиспермальные антитела класса IgG может быть выявлены в сыворотке крови, но это исследование не имеет определяющего значения, так как антиспермальные антитела IgG не коррелируют с антиспермальными антителами Ig в сперме и не влияют на фертильность.

Анализ морфологии сперматозоидов при спермограмме

Оценку морфологии сперматозоидов выполняют после простого окрашивания или окрашивания по Папаниколау. Анализ морфологии сперматозоидов состоит в детальном исследовании 100 сперматозоидов, а также других клеток, представленных в эякуляте, включая лейкоциты и незрелые сперматозоиды. Сперматозоиды представляют уникальную популяцию клеток, из них 50 % могут быть с морфологическими дефектами, даже у здоровых мужчин. Эти дефекты затрагивают головку, среднюю часть или хвост (жгутик) сперматозоида. Регистрируют процент сперматозоидов с нормальной морфологией, а также индивидуальные отклонения, которые предполагают генетические дефекты, затрагивающие сперматогенез. В редких случаях мономорфной тератозооспермии, а также тяжелой астенозооспермии проводят ЕМ анализ, чтобы обнаружить специфические дефекты на ультраструктурном уровне, особенно в жгутике (хвосте), где находят неверную совокупность микротрубочек, как при синдроме цилиарной недостаточности.

В последние годы, Menkveld, Kruger и его коллеги описали строгие критерии для оценки морфологии сперматозоидов, при которых они получили хороший прогноз для оплодотворения в пробирке (in vitro). Они сообщают о нормальном уровне оплодотворения в пробирке для случаев с > 14%-ой нормальной морфологией сперматозоидов. Критерии Kruger’s для оценки нормальной морфологии сперматозоидов все еще обсуждаются. Однако, многочисленные исследования четко установили, что морфология сперматозоидов является важным параметром для оценки фертильности спермы.

Оценка морфологии спермы при проведении спермограммы также включает определение других типов клеток, представленных в сперме, таких как незрелые формы сперматозоидов и лейкоциты. Присутствие незрелых зародышевых клеток в сперме указывает на нарушение сперматогенеза в яичках, тогда как лейкоциты в концентрации, превышающей 1x103/мл, указывают на воспаление, возможно связанное с инфекцией.

Различие между лейкоцитами и клетками сперматогенеза

Различия между клетками сперматогенеза и лейкоцитами не всегда очевидны, и это особенно важно в случаях азооспермии. При азооспермии присутствие клеток сперматогенеза указывает на нарушение сперматогенеза в яичках, в то время как присутствие лейкоцитов в сперме при отсутствии любых клеток сперматогенеза позволяет предположить, что азооспермия связана с нарушением проходимости семявыносящих протоков.

Присутствие в сперме дегенерированных клеток сперматогенеза, иногда можно перепутать с лейкоцитами. В частности многоядерные сперматиды могут быть ошибочно приняты за полиморфноядерные лейкоциты. Окрашивание эндогенной пероксидазы, которая присутствует в полиморфноядерных лейкоцитах, помогает дифференцировать эти два типа клеток.